采用物理的，化学的、生物的和复合的致病因素，造成动物机体组织、器官或全身出现类似人类疾病时功能、代谢或形态结构方面的改变。

　　利用生物化学方法导入外源性基因，删除或修改、原有基因，使得基因修饰后的动物可用于研究人类疾病的病因、发病机制和治疗。

　　如大脑中动脉闭塞模型MCAO，坐骨神经慢性压迫损伤模型CCI，脊神经结扎模型SNL

　　23%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后将小鼠平躺在手术台上胶带固定四肢，将小鼠腹部术去毛，用碘酒和75％乙醇术区消毒。

　　3取腹正中切口1cm，打开腹腔，小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂（左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉）。

　　4用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉，使约70%的肝脏缺血，以防止发生严重肠系膜静脉淤血。0.5min后，与非阻断的右叶相比，肉眼可见阻断叶明显变白，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。

　　5完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功，逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔，完成手术。待小鼠清醒后放回饲养室饲养，密切关注小鼠的状态及生存状况并做好记录。

　　6术后分别于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。采用全自动生化分析仪检测血清中ALT（谷丙转氨酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）的水平。同时统一取肝左叶组织1．5cm×1cm×0．2cm留作病理标本或分生标本

　　采用致病因素诱导，使动物出现一系列的组织，器官，全身的机体改变，类似人类疾病时功能，代谢，形态结构改变。

　　如糖尿病模型，高血压模型，帕金森PD动物模型，阿尔兹海默AD动物模型等。

　　1用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌。选用成年封闭群大鼠，雌雄不限，给予0.25％DEN水溶液0.25～1ml灌胃或稀释10倍，放在饮水瓶中自由饮水，剂量为每天2～10ml/kg，喂养半年左右。

　　2用4-二甲基氨基偶氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌。选用成年大鼠，用含0.06％ DBA饲料喂养，饲料中维生素B2不应超过1.5～2mg/kg，连续喂养4～6个月。

　　3用2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发大鼠肝癌。给成年大鼠喂含0.03％ 2AAF的饲料，每日每只平均2～3 mg，连续3～4个月。

　　4 用亚氨基偶氮甲苯（OAAT）诱发大鼠肝癌。选用成年大鼠，用含1％ OAAT苯溶液涂在大鼠的两胛间皮肤上，隔日1次，每次2～3滴，连续7～8周。

　　5用黄曲霉素诱发大鼠肝癌。饲料中含0.001～0.015mg/kg混入饲料中喂6个月。

　　向动物体内导入外源基因或删除，修改原有基因，研究基因修饰后动物，模拟人类基因遗传方面的病因，发病机制及治疗，还可以消除种属差异。

　　如通过ES细胞囊胚注射或受精卵显微注射，实现转基因，基因敲除，基因点突变，基因敲入等基因修饰目的。传统ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9，还有TetraOneTM 基因敲除新技术。

　　1构建包含人源PD-1基因胞外蛋白对应序列（包括第二个外显子的全部序列和第三个外显子的部分序列）的打靶载体；

　　4嵌合体子代与C57BL/6N进行杂交，经背景纯化最终得到纯合的PD-1人源化小鼠模型。BOB综合体育官方APP下载