BOB综合体育官方APP下载二十种常见实验动物模型一、缺铁性贫血动物模型缺铁性贫血（irondeficiencyanemiaIDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约23儿童和育龄妇女缺铁，其中13患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animalmodel是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下：实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g右，HG》130gL。建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含1563mgKg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂4030mgKg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂周后进行，常用尾静脉放血法，1〜15ml次，2模型指标：（1）HG陳100gL（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCH（降低；（3）清铁（SI）降低，常小于10卩molL，血清总铁结合力（TIBC）增大于60卩molL。需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研根据具体的研究需要，也可以适当调整建模方法。二、白血病动物模型用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病（SCID）鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCID-hu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCID－hu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCID-hu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类物。造模方法：SCID-hu小鼠：CB-17scidscid繁殖的近交小鼠（SCID）,周龄时用抗生素处理。在无菌条件下，19~23妊娠周龄的胎儿取出股骨和胫骨，剪成5mm5mmKmm的骨片，植入SCID小鼠皮下，并从每个胎儿供体制备胸腺细胞用于检测同种异体HLA。104个活细胞（常用冻存解冻后的细胞）悬浮于含10%胎牛血清PMI1640培养液20d,用微注射器将细胞悬液直接注射人前植入SCID-hu小鼠的人胎骨片内。选择移植骨与白血病细胞的供体是HLA同种异型，便于追踪人肋骨移植片中细胞的来源。白血病细胞的体内传代：将已生长有白血病细胞的骨移植片再制备细胞悬液，（05~2）X106个活细胞，注SCID-hu受体小鼠的移植骨片内。处理小鼠MHC-I（主要组织相容性复合体I类）抗原的单抗，直接与染料荧光素异硫氰化物或藻红蛋白结用流式细胞仪将细胞分类并分析细胞来源。周时，骨片内有坏死与纤维化，CFUkGM与BFU周时，骨片内出现由淋巴系与未成熟的髓系细胞组成的造血中心；周后，植入胎骨片结构与正常胎儿造造血骨髓类似，并能维持正常造血达20入骨片的细胞中人类细胞占70%以上，而小鼠细胞仅占5%~20%。胎儿骨片内的人类基质细胞可刺激人的造血干细胞的增殖与分化，维持正常造血。将人的急性髓性白血病细胞注入SCID-hu小鼠的一块胎儿骨片内的正常造血细胞被急性白血病细胞的增殖所取代，而且还选择性地转移到植入的其他胎骨片内。该模型是人类白血病细胞生长在小鼠体内的人类造血微环境中，因此能更精确地用来研究人类自血病发病机制与对新疗法的评价，目前研究白血病的最佳动物模型。该模型的建立原理与方法也适用于其他白血病与恶性肿瘤动物模型的建立。但应注意植入小鼠的胎片与成人骨舱造血钉些不同。三、支气管哮喘动物模型支气管哮喘是一种由肥大细胞、嗜酸性粒细胞和细胞等参与的慢性气道炎症，伴有气道反应性增高及结构重建的疾病。对于敏感的人群，这种炎症引起喘鸣反复发作、呼吸困难、胸闷和咳嗽，尤其好发于夜间或清晨。这些症状常与广泛而有变动的气道阻塞相关，因气道对某些刺激物反应性增高而发生。国内目前使用的动物模型多数是卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型卵蛋白作为致敏原进入动物体后，其可溶性抗原成分可以刺激机体产IgE抗体，使机体致敏。当动物再次接触卵蛋白时，IgE介导发生抗原抗体反应，使炎症细胞脱颗粒，释放活性化学物质，作用于支气管引起哮喘。实验对象：雄性豚鼠建模方法：1．抓取豚鼠，腹腔注射10%卵清蛋白1ml实验技术室老师在实验进行前15天预先注射）。15天，雾化吸入1%卵清蛋白（最好是当天配制）60s激发，观察动物呼吸和一般情况，有无咳嗽、呼吸加深加快、烦躁不安等症状。随后继续吸入10~30min,直至出现上述症状为止。把动物放入含5g钠石灰的缺氧瓶中,用凡士林涂在瓶塞周围,塞紧瓶塞,连通水银检压计。记录时间和室内温度,每隔3min记录水银面刻度迅速从缺氧瓶中取出动物,仰卧固定在大鼠手术台上。在颈部正中做切口,用止血钳分离气管周围组织,下面穿线备用。在气管甲状软骨下T”字型切口，插入连接三通管的气管插管并结扎固定。部,改变豚鼠,尽可能使生理盐水冲洗到每一肺叶。然后回抽,收集支气管－肺泡灌洗液。将收集到的BALF放入小试管，2000rmin5min离心。弃去上清,用ml生理盐水重新溶解沉淀,并轻轻摇晃混匀,进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数。观察指标：观察动物呼吸情况和一般状况,有无呼吸加深加快、BALF中白细胞和嗜酸性粒细胞计数。测定豚鼠耗氧量。四、感染性休克动物模型常见的感染性休克是由革兰氏阴性杆菌感染引起并通过大量产毒素导致休克。本实验通过静脉注射内毒素，导致动物急性感染性休克。实验对象：家兔建模方法：1．抓取家兔并称重，3%戊巴比妥钠1mlkg耳缘静脉麻仰卧固定在家兔手术台上。2．剪去颈部被毛，作颈正中切口，分离气管，做气管插管。分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉，穿线备用。剪去下腹部被毛，切开皮肤，沿腹白线打开腹腔。暴露膀胱，分离两侧输尿管，结扎尿道口并进行膀胱插管，连接上记滴器。打开电脑，启动BL-420E生物机能记录系统，选择实验模块： “泌尿实验”中的“影 响尿生成的因素” ，进行每分钟尿量记滴。 ％肝素1mlkg ，进行全身肝素 在右侧腹直肌旁做纵形切口，钝性分离肌肉， 打开腹 腔。将一段游离度较大的回肠袢轻轻拉出，平展于事先已注入 37C 生理盐水的观察微循环的恒温灌流盒内，用显微镜观察肠系膜微循 进行右侧颈总动脉插管，连接BL-420E 生物机能系统 通道，记录血压。 进行左侧颈外静脉插管，插管约插入5~6cm通过三通 管连接压力传感器， 如果观察到压力数值降为负值且随呼吸上下波动， 录数值，为中心静脉压。三通管另一侧连接静脉输液装置。稳定5min, 记录 一段正常各项指标。 coli0111B4）1mlkg 8000亿细菌kg，观察并记录注射后 5min、 10 min、15 min、 20 min、 30 min、 min各指标变化。 960min 后，快速从静脉输入生理盐水 20mlkg ，并在生 理盐水中 加入654-2 5mgkg，观察并记录各指标变化。 观察指标： 呼吸频率与幅度、血压、皮肤粘膜颜色和小血管、中心静 脉压、尿量、肠系膜微循环（包括：微循环中微血管的流速，口径和 每个低 倍镜视野下开放的毛细血管数目） 五、肝硬化动物模型选体重150-200g 的Wistar 大鼠，将D-氨基半乳糖配制成10% 的生理盐 水溶液，用1NNaO将pH调节至70,以250mgkg 的剂量行 腹内注射，每天 一次，每周6 天，约半年左右即可形成肝硬化。在复 制过程中，自股动脉取 血作肝功能试验，包括血清蛋白测定、浊度试 验、转氨酶、乳酸脱氢酶（LDH、单胺氧化酶（MA0）5 -核苷酸酶 （5-NA）、 -谷氨酰转肽酶（丫―GT）及胆硷酯酶。分批处死动物进行 尸解，观察 腹水，心、肝、脾、肺肾等器官形态 4％甲醛溶液固定，石蜡包埋， 切片厚5 微米，进行HE 网状纤维（Gordon 与Sweet 胶原纤维（Van Gieson 及弹力纤维（Weiger 染色。在采用上述剂量D-氨基半乳糖长期多次注入大鼠腹腔时，动物 耐受 性较好。逐渐出现进食活动减少，有时解稀糖大便，腹部较为膨 隆。半年 内与对照组相比，实验组体重平均增长显著延缓。 尸检时可见腹腔内有腹水， 0-20ml 明显改变。与对照组相比， 早期肝明显增大、 重量增加，色泽较灰黄， 以后 体积逐渐缩小，质地变硬，边缘较钝，肝表面可见弥漫性分布的 细颗粒状 结节，结节大小不一，直径约为 05-15mm, 结节间可见弥 漫分布的纤维间 隔，间隔一般较细小，其凹凸程度随病变而加深。切 片HE 染色、光镜下 检查，在注射氨基半乳糖 个月后，肝小叶结构开始紊乱 形成大小不等的肝细胞团，有的仍见好的中央静脉，但其 周围门脉区胆管上皮高度增生， 其间夹有残留的个别肝细胞及少量单 核多核白细胞及褐色素沉着。 随着 病程的延长， 增生的胆管及纤维母 细胞向四周呈星芒状伸展， 有的与中 央静脉相连。 一般肝细胞变性坏 死少见， 大多呈增生表现。 Gordon Sweet法染色显示肝细胞团中 网状纤维少见而周围组织中存在着大量疏松 的网状纤维。 胶原纤维及 弹性纤维均未见增多。除肝外，其余实质器官 切片无异常发现。 实验动物在出现肝硬化时血清白蛋白含量稍有降低 浊度试验略文档 增高，血清GPT LDH MAO5-NA、丫 -GT与胆硷脂酶均无明显改变。 六、急性出血性胰腺炎动物模型 胰腺炎是指胰腺及其周围组织被胰腺分泌的消化酶自身消化的 化学性 炎症，其中出血坏死型胰腺炎死亡率高达 30%。胰腺分泌过度 旺盛、胰液排 泄障碍、 胰腺血循环紊乱与生理性胰蛋白酶抑制物质减 少都能促发胰腺炎。 胰腺分泌的各种蛋白酶是一酶原形式存在的， 种酶原在进入十二指肠后，在肠激酶的作用下被激活。因此，通过反 灌肠液（含活性蛋白酶）可致急性 出血性胰腺炎。 选家兔（体重 2kg 左右）麻醉固定后，在无菌操作下由腹中线cm至脐）,进入腹腔找到胰腺。找到十二指肠的升部胰 导管开 口，在靠近肠管处穿线，将胰管结扎。在近胰腺端再穿一线， 已备注射后结 扎用。接着用注射器自十二指肠内抽取肠液 号针头快速注入胰管内，使肠液能进入细小的胰管中， 甚至进入 织内。拔出针头后，立即将胰管在针孔的远端结扎，以免注射物逸出。操作 完毕后即可缝合腹腔。 术后 1d 就发生明显的出血性胰腺炎，表现为白细胞计数升高， 血清淀 粉酶激素急速升高。 七、大鼠急性心肌缺血 垂体后叶素（ pituitrin ，Pit ）含缩宫素和抗利尿激素。其中的 抗利尿激 素能收缩血管，使血压升高，又称加压素。过量注射 Pit 引起冠状动脉强烈痉挛性收缩。 利用它的这一特点， 复制急性心肌缺 血乃至心肌损伤的动 物模型 实验对象：大白鼠 建模方法： 1．抓取大白鼠并称重， 25%乌拉坦 4mlkg 腹腔注射麻 仰卧固定在大白鼠手术台上，分别在大白鼠的右前肢、右后肢和左后肢插入 银针或注射用针头，然后将下述颜色的鳄鱼夹夹上针头： 右前肢：白色，右 后肢：黑色，左后肢：红色，弓I ．沿颈正中切开皮肤，分离颈外静脉，穿线做静脉插管。打开计算机，启动BL-420E 生物机能实验系统。经第1 通道，选 择试验 项目：心电。描记一段正常心电图。 经插管处注射Pit2Ukg，记录给Pit 后10、15、 20、30、45、60s 率、S-T段、T波的变化，一般以注射后30s出现S-T段升高或 2min 低平作为心肌缺血的指标。实验注意事项： 行模型的复制。2Pit 导致的急性心肌缺血波形的改变消失较快， 可以反复、 多次注 八、急性呼吸窘迫综合征动物模型急性呼吸窘迫综合征（ARDS 是一种以进行性呼吸困难与顽固性 低氧血 症为特征的急性呼吸衰竭。多发生于原心肺功能正常的患者， 透性增加，继发急性高通透性肺水肿和进行性缺氧性I 型呼吸衰竭。 虽病因各异，，临床表现均 为急性呼吸窘迫，难治性低氧血症。 实验对象：犬、家兔、大鼠 建模方法： 1．骨髓提取液所致 ARDS 用提取骨髓液 （18〜23kg），以14~17mg提取液静脉注射，可建立 ARDS 模型。 动物静 脉注射骨髓提取液后，立即出现呼吸增快、窘迫、紫绀，双肺 满布哮鸣音， 2h出现罗音。光镜检查见肺泡及间质水肿、出血、 透明膜形成、急性肺 炎、肺不张、肺气肿、嗜酸细胞浸润、血管内及 肺间质脂肪栓塞。 ．佛波醇十四酸乙酸所致ARDS 取体重 2~4kg 健康家兔，常规麻醉，仰卧固定，经耳缘静 脉注射PMA（4Om0kg）。急性呼吸窘迫持续4~6h，伴有肺出血，以后 进入 弥漫性肺间质炎， 进而发生肺纤维化。 整个病理过程与临床 ARDS 甚相似， 是观察肺纤维化较理想的模型。模型成功复制后，动物出现 呼吸增快、窘迫、 紫绀，双肺满布哮鸣音。光镜检查见肺泡及间质水 肿、出血、透明膜形成。 九、应激性胃溃疡动物模型 应激是指机体在受到内外环境因素刺激时所出现的非特异性全 身反应。 当机体处于温度过高、过低、手术、中毒、感染等的强烈刺 激时，除引发直 接效应外，还出现交感 肾上腺髓质和下丘脑-垂体- 肾上腺皮质轴兴奋为主 的神经内分泌反应。 其发生机制主要是由于儿 茶酚胺增多导致内脏血流减少， 胃肠粘膜缺血， 致使胃粘膜屏障遭到 破坏，H+反向弥散有关。 实验对象：大鼠 建模方法： 取大鼠，禁食24h,将其固定于特制的木板上，垂直浸于（23 水中，水深至剑突；24h后取出，即可复制此模型。脱椎处 死，打开 腹腔，结扎幽门和贲门，胃内注入 8mL的1 沟醛溶液；将 胃取出浸入甲醛溶 液中，30min 后沿胃大弯切开，测量每个溃疡长度。 计算全胃溃疡长度之和 为溃疡指数。 此模型可用于应激性溃疡的发病 机制和胃粘膜保护药物的研究。 十、学习记忆障碍动物模型 现代神经生理学认为， 学习是指人或动物通过神经系统接受外界 环境信 息而影响自身行为的过程。 记忆是指获得的信息或经验在脑内 贮存和提取 再现的神经活动过程， 二者密切相关。 按照信息论的观 点，学习记忆的基 本过程大致可分为三个阶段： 获得 acquisition 是通过感觉系统向脑内输入讯号的阶段，也就是学习阶段；巩固 consolidation ，是获得的信息在脑内 编码贮存和保持的阶段；再 retention，是将贮存于脑内的信息提取出来 使之再现于意识中 的过程；后二者属于记忆阶段。 实验对象：小鼠 建模方法： 1．记忆获得障碍实验：腹腔注射东莨菪碱 2mgkg 钟进行跳台实验。 ．记忆巩固障碍实验：小鼠进行跳台实验，测试学习能力。学习完 后立即腹腔注射 NaNO220mgkg,以复制记忆巩固障碍模型。 24 小时后进行 记忆能力测试。 ．记忆再现障碍实验：小鼠进行跳台实验，测试学习能力。于训练后24h,记忆测试前20min,灌胃30%乙醇10mlkg 复制记忆 再现障碍动 物模型，然后测试记忆成绩。 实验时保持周围环境安静,尽量减少对小鼠的干扰。 十一、血管性痴呆动物模型 实验对象： 选用健康H级SD雄性大鼠，体重280-320g,动物于安静环境下 分笼饲养， 室温控制在22 的范围内，相对湿度60%光线: 00-07 交替，给予充足清洁 饮水、摄食。 建模方法：大鼠 10%水合氯醛腹腔注射 1g kg 麻醉后，将其仰 卧固定。 分离右颈总动脉 CCA 颈内动脉ICA 及颈外动脉 ECA 并挂线备用，结 扎ECA与CCA用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于 ECA与 ICA分义处作 一切切口，从切口处插入一端加热成光滑球形尼 龙线;。线插入ICA后，于入 日处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段， 然后松开夹闭ICA的动脉夹， 继续插入尼龙线至稍有阻力后略回撤，至线;mm左右，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。再次结扎入口处。缝 合皮肤。 2h 后轻轻提拉所留线头至有阻力，实现大脑中动脉再 则造模完成。纳入标准： 动物入选的标准按照 Zea Longa 级评分法取评分为2,3,4 物于缺血2h 后出现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧 倒体征则纳入， 动物无此体征或于缺血 2h 后仍不清醒者弃去。 十二、酒精性肝病动物模型 实验对象：体重125- 155g雄性SD大鼠，环境温度18C— 20 0C, 湿度 70% 左右，自由采食全价营养颗粒饲料，垫料为紫外线消毒后的 卫生纸。 将酒精体积分数为 52的红星二锅头自酒 北京酿酒总厂生产 积比分别稀释成400Io 450Io 500Io 备用。建模方法：按每周所测得的体重给子每日早晚白酒灌胃各 将稀释成40%的白酒按剂量 4gkgd 、每次 5m1100g 8gkgd、每次 0ml100g, 灌胃，第 始将稀释成45%的自酒按 9gkgd, 每次 10m1 100g 灌胃，第 将稀释成50%的白酒按 0gkgd 每次10m1 100g 灌胃，第 11 周起改用自由饮酒至第 12 周，以浓度 50%白酒 作为主要饮料，日供 给量40ml，同时限制饮水。 纳入标准： 弃去死亡的大鼠，即为模型大鼠。 十三、肝郁脾虚证动物模型 实验对象：健康雄性 SD大鼠，体重230 10g，SPF 有动物提前购入，适应性饲养 3d, 笼。光照节律12L: 12D6 00~18:00,室温22 C，保持动物室安静。相对湿度保持3% 40%，喂常规颗粒饲料及饮用水。建模方法：大鼠适应性饲养 3d 后进行初步筛选，将过于活跃和 过于安 静的大鼠排除 以慢性束缚方法制作慢性应激大鼠模型，束缚架自制（T型束缚台：底座宽10 cm,长20 cm,厚2 cm）上端束缚台长22 cm, 66cm, 两侧分别有适合四肢放置的四槽及一条可调节 的粘贴软 ，将大鼠束缚于束缚架上，两条粘贴软带分别固定大鼠的胸部和腹部， 放入饲养箱中，每日 3h, 点到11 连续21d, 纳入 弃去死亡大鼠，即为模型大鼠。 十四、糖尿病动物模型 实验对象：健康SD大鼠60 只，SPF 级，雄性，体重190~ 230g 大鼠预先饲养 3d 建模方法：造模前动物禁食 16 50mg kg 的剂量一次性快 速腹腔注 5%的链脲佐菌素。注射完后给食给水，2h 后灌胃给予 25%的葡萄糖水， 防止大鼠低血糖的发生。于造模后第 分别测定尿糖和空腹6h 的血糖。尿糖阳性且空腹 6h 血糖》167 mmol 者为糖尿病大鼠。十五、肾虚证动物模型 实验对象：选用6 周龄无特殊病原体级SD大鼠，雌雄各半。正 常饲料 适应性喂养 建模方法：去势法 按常规方法做去势手术，即摘除双侧卵巢与睾丸，术后28 d，取适量牛II 型胶原溶液（浓度为2 L）逐滴加入至等容积的不完全 弗氏佐剂中，牛 冰浴中用匀浆器充分乳化以滴入水 中不打扩散为度；取乳化后的混合物，按0 ll型胶原 只，于尾根部皮下注射;7d 01mL 100ug 11型胶原只，于 尾根部皮下加强免疫一次。 纳入 弃去死亡大鼠，即为模型大鼠。 十六、虚寒证动物模型 实验对象：SPF 级雄性SD大鼠雌雄各半，体质量240 10g。建模方法：以注射用氢化可的松琥珀酸钠 20mg kg 肌肉注射， 每天 次，连续14 纳入弃去死亡大鼠，即为模型大鼠。 十七、骨质疏松动物模型 实验对象：健康SPF 级雄性SD大鼠，12 月龄，体质量330 温19~23C室内饲养，每日12h 光照，定量给食，自由饮 110mg kg ip 麻醉后，经腰背部切 口切除 双侧卵巢，手术后分笼饲养。 纳入 手术 周后，弃去死亡大鼠，即为模型大鼠。十八、血瘀型颈椎病动物模型 实验对象：健康SPF 级雄性SD大鼠，3 月龄，体质量330 建模方法：首先采用动静力失衡造大鼠颈椎间盘退变模型。 1kg体质量行腹腔注射麻醉， 取颈背部正中 纵向切口，长约 cm，切开皮肤后，横向切断 建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型。 观察 25 个月后，采用肾上腺皮质激素 加肾上腺素应用法造出血瘀症型， 氢化可的松10mgkg 体质量肌肉注射，用 药13 d,然后肾上腺素036 mgkg 体质量皮下注射，用药1 纳入弃去死亡大鼠,即为模型大鼠。 十九、激素性股骨头坏死动物模型 实验对象： 月龄健康Wistar 大白鼠雌雄各半。以正常饲料适 应性喂养 建模方法;精确称重后,肌肉注射磷酸钠 10 mgkg 共注射14 纳入弃去死亡大鼠,即为模型大鼠。 二十、膝关节骨性关节炎动物模型 实验对象： 健康 月龄新西兰大白兔52 只,雌雄各半, 空腹体重 2~25kg 建模方法：先剪去兔左后肢踩关节以上 1cm—腹股沟下1 cm区域兔毛， 树脂绷带经65 85C热水浸泡软化后，以兔膝关节为中 心缠绕，松紧以不 脱落为度，使兔膝关节仲直位固定，模型制备过程 中随时观察绷带固定情况， 若出现松动或脱落者要及时重新固定， 纳入若制备的模型兔出现足底溃烂、感染、上呼吸道感染、骨折等动